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牛血清白蛋白BSA的分餾

發(fā)布時間: 2023-09-25  點擊次數(shù): 1015次

 

牛血清白蛋白Albumin from bovine serum,BSA,是牛血清中的簡單蛋白,是血液的主要成分(38g/100ml),分子量66-68kD,等電點4.8,含氮量16%,含糖量0.08%。僅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581個氨基酸殘基組成,其中35個半胱氨酸組成17個二硫鍵,在肽鏈的第34位有一自由巰基。白蛋白可與多種陽離子、陰離子和其他小分子物質(zhì)結(jié)合。血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用,貢獻80%的滲透壓、PH緩沖作用、營養(yǎng)作用,載體作用,可以攜帶眾多的物質(zhì)進行循環(huán),包括脂肪酸,金屬離子,膽紅素,激素和藥物。

牛血清白蛋白Albumin from bovine serum,BSA,又稱為 組分V,或Cohn V,名稱起源于BSA分餾法Cohn 冷乙醇法,Cohn法仍然是目前非常普遍的BSA分餾法,除了了冷乙醇法,目前主要的還有熱休克法和色譜層析法。

一、 Cohn 冷乙醇法

Cohn 冷乙醇法是由哈佛大學(xué)Edwin Cohn教授于1946年發(fā)明的,基于戰(zhàn)爭創(chuàng)傷治療對注射級別的蛋白的大規(guī)模需求,Cohn教授在較低的溫度下改變血漿的乙醇濃度和PH值,使其所含蛋白在不同的乙醇濃度下析出,在第五個析出的組分中主要成分即為BSA,所以BSA又稱組分V或Cohn V。

Cohn 法是早期的BSA分餾法,為后續(xù)的BSA分餾提供了重要的思路,但是Cohn法過程中血漿蛋白涉及乙醇和低PH酸變性,以及多種雜蛋白干擾,所以分餾的BSA的質(zhì)量上差強人意,相比其他更先進的分餾法,存在許多問題:

BSA蛋白變性,片段化,活性低;

BSA純度較低,雜質(zhì)含量高;

BSA產(chǎn)量低;

適用一般實驗,很難用于細(xì)胞培養(yǎng)。

二、    熱休克法

Cohn 法為大規(guī)模生產(chǎn)BSA提供了思路,但是因為涉及臨床使用,生產(chǎn)的BSA需要進行肝炎病毒滅活,血漿在9%乙醇和PH6.5的時候加熱至68度;熱休克法一般需要添加辛酸維持BSA不被變性。

熱休克法生產(chǎn)的BSA產(chǎn)量高,純度也高,逐漸取代Cohn法成為BSA分餾主要方法,但是熱休克法BSA也有一些缺陷:

BSA蛋白高溫變性,活性低;

辛酸對細(xì)胞有損傷,不適合細(xì)胞培養(yǎng);

純度低,加熱會產(chǎn)生很多變性BSA多聚體和一些片段化BSA,同時也會產(chǎn)生很多其他變性蛋白。

下面是biosera品牌下的牛血清白蛋白:

1. PM-T1725

牛血清白蛋白 (BSA) 凍干 pH~7

100/500/1000

2. PM-T1726

牛血清白蛋白 (BSA) 無蛋白酶凍干

100/500/1000

3. PM-T1727

牛血清白蛋白 (BSA) 不含脂肪酸凍干

100/500/1000

4. SA-296

牛血清白蛋白 (BSA) 30%

1000毫升

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