CST測試ELISA試劑盒的可靠性

發(fā)布時間： 2024-03-22　　點(diǎn)擊次數(shù)： 671次

即用型 ELISA 試劑盒無需科研工作者花費(fèi)時間摸索優(yōu)化條件，因此可以簡化研發(fā)的工作流程。其中至關(guān)重要的是，科研工作者選擇的 ELISA 試劑盒需要具有批次間高度可重復(fù)性，才能得到如預(yù)期的項(xiàng)目進(jìn)展。如果您的實(shí)驗(yàn)持續(xù)很長，但所使用的 ELISA 試劑盒批號中途變更了，那您需要確保新、老批次的表現(xiàn)是一致的、產(chǎn)生相似的信號/空白比，且任何批次間差異需在可接受的變異系數(shù) (%CV) 值范圍內(nèi)。

抗體作為 ELISA 試劑盒的核心組分，與可重復(fù)性危機(jī)密切相關(guān)，即人們?nèi)找嬲J(rèn)識到的許多科學(xué)實(shí)驗(yàn)無法重復(fù)。確保實(shí)驗(yàn)可重復(fù)，需要研究人員謹(jǐn)慎選擇產(chǎn)品，并且要求抗體制造商確保高質(zhì)量、經(jīng)過很嚴(yán)格驗(yàn)證的產(chǎn)品供科研工作者使用。至關(guān)重要的是，抗體應(yīng)對其靶標(biāo)表現(xiàn)出高度特異性，并應(yīng)在其所適用的應(yīng)用中都經(jīng)過嚴(yán)格驗(yàn)證。

在 CST，開發(fā)和上市銷售抗體時，我們堅(jiān)持遵守 Hallmarks of Antibody Validation^™，以確保您獲得自己可以信任的數(shù)據(jù)。對于不同的抗體，會選擇這六種補(bǔ)充性驗(yàn)證策略中合適的方法對抗體進(jìn)行嚴(yán)格驗(yàn)證，進(jìn)而確?？贵w在任何測定法中的特異性、靈敏度和功能性符合要求。這意味著，當(dāng)選擇 CST^® 抗體時，該抗體的性能保證在我們公司產(chǎn)品保證范圍內(nèi)。

我們的抗體是即用型 FastScan^™、PathScan^® 和 PathScan^® Rapid Protocol (RP) ELISA 試劑盒的基礎(chǔ)，所有這些試劑盒均使用雙抗夾心法，與直接和間接 ELISA 相比，靶標(biāo)特異性更加優(yōu)異。在設(shè)計(jì)和生產(chǎn) ELISA 試劑盒時，通過確定最佳抗體對并預(yù)先進(jìn)行所有試劑盒的開發(fā)和驗(yàn)證，來確保您項(xiàng)目全程數(shù)據(jù)的質(zhì)量。

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作為產(chǎn)品科學(xué)家，在 CST 工作的6年間，我的大部分職責(zé)是測試公司 ELISA 試劑盒的批間差異，以確保批次間的一致性?？茖W(xué)可重復(fù)性是 CST 的核心價值觀，這在我們嚴(yán)格驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)中已體現(xiàn)。最終，我們希望無論客戶收到哪一批次的試劑盒，他們的研究可以不中斷，且結(jié)果可信任。通過按照公司既定的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 (SOP) 生產(chǎn)每個批次的ELISA 試劑盒，可確保研究人員獲得的結(jié)果具有一致性、可靠性。

ELISA 試劑盒批次測試要求

在向研究人員提供任一新批次 ELISA 試劑盒之前，我們都進(jìn)行一系列全面測試。這些測試起到確認(rèn)新批次對目的靶標(biāo)具有高度特異性（低背景信號）、與當(dāng)前批次相當(dāng)?shù)撵`敏度和具有產(chǎn)生寬動態(tài)范圍靈敏度曲線的能力。

我們會進(jìn)行如下測試：

有陽性對照和陰性對照的測試

根據(jù) ELISA，用于驗(yàn)證目的的對照可以是生物學(xué)相關(guān)的樣品或靶標(biāo)蛋白內(nèi)源水平已知（高表達(dá)和低表達(dá)）的樣品。通過同時用老批次和新批次的 ELISA 試劑盒生成不同蛋白質(zhì)濃度下吸光度信號變化的平行滴定曲線，我們可以確認(rèn)各數(shù)據(jù)集間的關(guān)聯(lián)。由于每個模型系統(tǒng)都不同，我們建議客戶參考我們的滴定曲線來確定自己的樣品上樣蛋白質(zhì)濃度。

由于我們的 FastScan、PathScan 和 PathScan RP ELISA 試劑盒是對相對（而非絕對）定量進(jìn)行驗(yàn)證，因此它們不包含標(biāo)準(zhǔn)品。相反，我們建議樣品可依據(jù)蛋白質(zhì)含量或細(xì)胞數(shù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。不過，F(xiàn)astScan 試劑盒會提供凍干的陽性對照，以驗(yàn)證分析性能。

光密度 (OD) 信號閾值

對于待驗(yàn)證的 ELISA 試劑盒批次，陽性對照樣品必須具有大于 1.5 的絕對光密度 (OD) 值，而空白樣品的信號閾值應(yīng)低于 0.3。在測試我們的 PTM 特異性 ELISA 試劑盒時，我們還設(shè)置了適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)閾值，以確保磷酸化對照樣品的信號顯著高于陰性非磷酸化對照樣品的信號。

此外，相對于最高滴定點(diǎn)，新批次ELISA 試劑盒的信號/空白比必須大于5.0。該值必須落入類似于現(xiàn)有批次的范圍內(nèi)，以便新批次符合我們的可重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)。

PathScan^® Phospho-SMAD2 (Ser465/467)/SMAD3 (Ser423/425) Sandwich ELISA Kit #12001 的信號/空白比數(shù)據(jù)摘要
濃度 (mg/ml)	#12001 第 34 批	#12001 第 35 批
0.075	18.3	16.9
0.0375	11.9	11.9
0.01875	7.8	7.7
0.009375	4.8	4.8

變異系數(shù)百分比 (%CV) 值

驗(yàn)證新 ELISA 試劑盒批次的另一個關(guān)鍵參數(shù)是 %CV。為了生成該值，我們對新批次中隨機(jī)選擇的三個板條運(yùn)行滴定曲線，以確定每個重復(fù)的平均值 (μ) 和標(biāo)準(zhǔn)差 (SD，σ)，然后應(yīng)用以下公式：

%CV = (σ / µ) x 100

對于待放行的新批次，現(xiàn)有批次與新批次之間的分析間差異必須小于 15%。

PathScan^® Phospho-SMAD2 (Ser465/467)/SMAD3 (Ser423/425) Sandwich ELISA Kit #12001 的變異系數(shù)百分比 (%CV) 數(shù)據(jù)摘要
濃度 (mg/ml)	#12001 第 34 批	#12001 第 35 批	標(biāo)準(zhǔn)差	%CV
0.075	2.734	3.115	0.040	1.28
0.0375	1.781	2.201	0.030	1.34
0.01875	1.166	1.425	0.028	1.93
0.009375	0.710	0.894	0.015	1.66

為了確保我們的 ELISA 試劑盒隨時間推移性能保持一致，同時沒有信號的衰減，我們通常在保質(zhì)期過半時進(jìn)行質(zhì)量控制 (QC) 跟進(jìn)測試。

為您的下一次 ELISA 實(shí)驗(yàn)提供高質(zhì)量結(jié)果

即用型 ELISA 試劑盒可以為您的研究帶來許多益處，前提是要從可靠的制造商購買這些產(chǎn)品。您的測定結(jié)果的與使用的抗體高度相關(guān)。在 CST，我們使用經(jīng)嚴(yán)格驗(yàn)證的高質(zhì)量抗體作為 FastScan、PathScan 和 PathScan RP ELISA 試劑盒的基礎(chǔ)，每個新批次在可供給客戶之前都經(jīng)過全面測試。通過核實(shí)每個新批次的 ELISA 試劑盒與先前的具有相當(dāng)?shù)男阅?，我們旨在確保您的項(xiàng)目按計(jì)劃進(jìn)行，而無任何計(jì)劃外的中斷。

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